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生物力學誘導的肌切蛋白調控發育性髖關節發育不良的機制研究

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生物力學誘導的肌切蛋白調控發育性髖關節發育不良的機制研究
論文目錄
 
中文摘要第1-6頁
英文摘要第6-13頁
中英文縮略語對照第13-14頁
緒論第14-23頁
參考文獻第19-23頁
第一部分 髖關節發育不良患者及大鼠襁褓體位關節軟骨中肌切蛋白的含量測定第23-38頁
1.研究背景第23-24頁
2.實驗材料與方法第24-32頁
  2.1 主要實驗試劑及儀器第24-25頁
  2.2 入選患者第25-26頁
  2.3 排除標準第26頁
  2.4 實驗動物第26頁
  2.5 動物模型建立第26-27頁
  2.6 髖關節軟骨分離培養第27-28頁
    2.6.1 大鼠髖關節軟骨分離培養第27-28頁
    2.6.2 人髖關節軟骨分離培養第28頁
  2.7 細胞傳代第28-29頁
  2.8 細胞凍存與復蘇第29-30頁
    2.8.1 細胞凍存第29頁
    2.8.2 細胞復蘇第29-30頁
  2.9 Real-time PCR法檢測m RNA的表達第30-32頁
    2.9.1 Trizol法提取髖關節軟骨細胞的RNA第30-31頁
    2.9.2 RNA 反轉錄實驗第31頁
    2.9.3 Real-time RT-PCR反應體系第31-32頁
3.統計方法第32頁
4.結果與分析第32-35頁
5.討論第35-36頁
參考文獻第36-38頁
第二部分 不同強度的循環應力對關節軟骨退變的影響及相關機制研究第38-63頁
1.研究背景第38-40頁
2.實驗材料與方法第40-50頁
  2.1 主要實驗試劑及儀器第40-41頁
  2.2 軟骨細胞加載循環應力裝置第41頁
  2.3 大鼠髖關節軟骨細胞的分離、培養、凍存、復蘇第41-42頁
  2.4 大鼠髖關節軟骨細胞體外加力誘導模型的建立過程第42頁
  2.5 加力前后軟骨細胞增殖、凋亡的檢測第42-44頁
    2.5.1 Alamar Blue法測定細胞增殖活力第42-43頁
    2.5.2 Annexin V-PI法檢測加力前后軟骨細胞的凋亡情況第43-44頁
  2.6 細胞染色實驗第44頁
  2.7 SCIN siRNA設計與轉染第44-46頁
    2.7.1 siRNA設計第44-45頁
    2.7.2 轉染步驟第45-46頁
    2.7.3 siRNA沉默效率第46頁
  2.8 Real-timePCR法檢測m RNA的表達第46-48頁
    2.8.1 Trizol法提取髖關節軟骨細胞的RNA第46-47頁
    2.8.2 RNA 反轉錄實驗第47-48頁
    2.8.3 Real-time RT-PCR反應體系第48頁
  2.9 蛋白質印跡分析第48-50頁
    2.9.1 蛋白樣本制備第48-49頁
    2.9.2 電泳第49-50頁
    2.9.3 轉膜第50頁
    2.9.4 抗體染色第50頁
3.統計方法第50-51頁
4.結果與分析第51-59頁
  4.1 軟骨細胞加載循環應力裝置模式圖第51頁
  4.2 應力加載誘導的關節軟骨退變第51-53頁
  4.3 應力刺激下對關節軟骨的影響及敲減SCIN后對軟骨退變的影響第53-56頁
  4.4 應力刺激激活NF-κB P65 通路,以及聯合BAY-11-7082 對軟骨退變的影響第56-59頁
5.討論第59-61頁
參考文獻第61-63頁
第三部分 不同強度的循環應力對成骨-破骨穩態的影響及相關機制研究第63-89頁
1.研究背景第63-65頁
2.實驗材料與方法第65-78頁
  2.1 人BMSC的分離純化第65-67頁
    2.1.1 倫理問題第65頁
    2.1.2 主要試劑和設備第65-67頁
    2.1.3 人BMSC的分離純化方法第67頁
  2.2 BMSC多向分化潛能檢測第67-68頁
    2.2.1 所需試劑的配制第67-68頁
  2.3 BMSCs的鑒定第68-70頁
    2.3.1 本實驗所需試劑配制及主要儀器設備第68-69頁
    2.3.2 MSCs表面marker鑒定第69頁
    2.3.3 BMSCs增殖能力檢測第69-70頁
  2.4 BMSC成骨、成脂分化誘導第70頁
    2.4.1 BMSC成骨誘導分化第70頁
    2.4.2 BMSC成脂誘導分化第70頁
  2.5 Real-time PCR第70-71頁
  2.6 Western blot第71-73頁
  2.7 堿性磷酸酶染色第73-74頁
  2.8 茜素紅染色第74頁
  2.9 破骨細胞的分離和培養第74-77頁
    2.9.1 主要試劑和儀器設備第74頁
    2.9.2 動物來源第74-75頁
    2.9.3 主要試劑的配置第75-76頁
    2.9.4 骨髓單核/巨噬細胞提取和培養第76頁
    2.9.5 破骨細胞鑒定-TRAP染色第76-77頁
  2.10 SCIN 過表達實驗第77-78頁
    2.10.1 轉染試劑和質粒構建第77頁
    2.10.2 慢病毒轉染步驟第77-78頁
3.統計方法第78頁
4.結果與分析第78-85頁
  4.1 人骨髓間充質干細胞分離鑒定第78-80頁
  4.2 循環應力加載條件下對MSC成骨及SCIN表達的影響第80-81頁
  4.3 過表達SCIN后對MSC成骨能力的影響第81-83頁
  4.4 SCIN對力加載條件下的破骨細胞分化的影響第83-85頁
5.討論第85-86頁
參考文獻第86-89頁
第四部分 SCIN對成骨-破骨的調控及體內實驗第89-104頁
1.研究背景第89-91頁
2.實驗材料與方法第91-96頁
  2.1 細胞培養的材料和儀器第91頁
  2.2 實驗動物第91頁
  2.3 實驗前準備第91頁
  2.4 股骨單層皮質骨缺損模型構建第91-92頁
  2.5 組織學檢測第92-95頁
    2.5.1 所需的試劑配制及實驗設備第92-93頁
    2.5.2 實驗動物取材及標本處理第93-94頁
    2.5.3 蘇木素-伊紅染色第94-95頁
  2.6 免疫熒光及激光共聚焦檢測第95-96頁
  2.7 western-blot第96頁
3.統計方法第96頁
4.結果與分析第96-101頁
  4.1 Smad1/5/8、MAPK P38 以及NF-κB參與SCIN調控成骨-破骨過程第96-99頁
  4.2 Micro-CT分析SCIN在裸鼠股骨缺損模型中的作用第99-101頁
5.討論第101-102頁
參考文獻第102-104頁
全文總結與展望第104-106頁
致謝第106-109頁
攻讀博士學位期間的學術論文與科研成果第109-111頁

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